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什么是ATCC細胞？如何使用它？

發(fā)布時間： 2022-10-22　　點擊次數(shù)： 2742次

　　ATCC細胞的原理在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。

　　細胞復蘇時速度要快，使之迅速通過細胞最易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。

　　ATCC細胞的使用方法：
　　1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
　　取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或隔夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。然后，用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，收集瓶內(nèi)液體于50ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用6ml*培養(yǎng)基重懸，全部接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，再放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細胞量很多，可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。
　　2、細胞傳代：細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時，收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml*培養(yǎng)基重懸細胞，按1:2的比例進行接種傳代，接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天更換培養(yǎng)液。換液的步驟同細胞NK-92細胞，ATCC細胞，培養(yǎng)技術(shù)傳代步驟。
　　3、細胞凍存：
　　a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時，收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細胞，并放置于凍存管中。
　　b、先將細胞凍存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。
　　4、細胞復蘇：
　　a、從液氮中取出細胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
　　b、將凍存管中的細胞移至含有5ml*培養(yǎng)液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min。
　　c、棄上清，沉淀細胞用6ml*培養(yǎng)基重懸，接種到培養(yǎng)瓶中，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　d、第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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